램프로부터 나온 다색광은 여러 파장을 분리하고,단색화장치 또는 필터에 의해 좁은 파장 범위의 빛만을 선택하여 시료에 지나가도록 합니다.시료를 통과한 빛은 광전측 광으로 흡광도를 측정하여 농도를 정량합니다.

입사광의 강도(I0)는 단색 광선이 시료를 통과하면 이 용액에 빛이 흡수되어 입사광의 강도가 감소합니다. 시료를통과하기 전과 후의 빛의 강도를 Lambert-Beer Law에 적용하면 다음과 같은 관계가 성립합니다. It와 I0의 관계에서 It/ I0 = T는 투과도이고,이 투과도에 마이너스 로그를 입힌 값이 -logT = A 흡광도입니다

검량선은 분석하고자 하는 미지 시료의 예상 농도와 유사한 농도 범위의 표준 물질 (최소 3개 이상)을 제조하여 흡광도를 측정합니다.표준 물질의 농도를 X축, 흡광도를 Y축에 놓고 그래프를 작성하고, 상관관계를 구합니다. 검량선은 거의 직선을 나타내는 범위에서 사용하는 것이 좋으며,시약이 바뀌거나 시험자가 바뀔때에는 검량선을 다시 작성하는 것이 좋습니다.

비색법으로 정량 분석을 할 때는 다음과 같은 조건들을 검토하여 결정해야 합니다.

- 발색한 시험용액에 대한 흡수곡선과 최대흡수파장

- 바탕시험액의 흡수곡선과 바탕시험치

- 액성의 변화에 따른 흡광도의 변화

- 최적 pH범위와 완충액의 종류 및 첨가량

- 마스킹이 필요할 때는 마스킹제의 종류와 첨가량

- 안정제, 산화방지제 등의 종류와 첨가량

- 온도변화 및 방치시간에 의한 흡광도의 변화

- 시약의 농도 첨가량 첨가순서의 영향

- 시료액에 대한 빛의 영향

- 용매추출을 할 때는 최적용매의 선정